發(fā)布時間：2025-06-18 22:50

　　結(jié)核分支桿菌（Mycobacterium tuberculosis）是結(jié)核病的主要致病菌。找到結(jié)核分支桿菌的特異性抗原對于發(fā)展準(zhǔn)確有效的診斷方法具有重要作用。結(jié)核分支桿菌TB4抗原是特指分子量集中于32KD⁴0KD、及28KD、23KD²5KD的多肽抗原組。它是與結(jié)核病特異性診斷相關(guān)的成份，對結(jié)核病診斷的敏感性為0.9012，特異性為0.9639�？梢�，這一成份在結(jié)核病診斷中具有一定的應(yīng)用價值。按照傳統(tǒng)的方法，TB4抗原的制備，要從結(jié)核分支桿菌H37Rv菌株中提取，既費(fèi)時又費(fèi)事，對人體造成致病威脅。而采用基因工程技術(shù)制備TB4抗原則克服了上述困難。 本研究從滅活的人型結(jié)核分支桿菌H37Rv菌株中提取細(xì)菌總DNA，根據(jù)TB4兩種抗原成份：TB32Ag和MPT64Ag的基因合成引物（P1，P2），以總DNA為模板，用特異性引物（P1，P2）進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR），擴(kuò)增出TB32Ag，MPT64Ag基因， 并進(jìn)行核苷酸序列分析。結(jié)果表明：所克隆的TB32Ag由568 bp組成，編碼189個氨基酸； MPT64Ag由644 bp...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
一、 摘要
    Abstract
二、 緒論
    2.1 抗原成份研究進(jìn)展
    2.2 結(jié)核分支桿菌TB4抗原
    2.3 TB32Ag與MPT64Ag抗原成份
    2.4 基因工程技術(shù)與結(jié)核抗原成份研究
    2.5 結(jié)核病的診斷現(xiàn)狀
三、 實驗材料
    3.1 菌種與質(zhì)粒
    3.2 各種培養(yǎng)基
    3.3 主要生化試劑
    3.4 基因工程酶類
    3.5 標(biāo)準(zhǔn)分子量Marker
    3.6 各種主要緩沖液
    3.7 主要儀器
四、 實驗方法
    4.1 結(jié)核分支桿菌H37Rv菌株DNA的制備與純化
    4.2 質(zhì)粒DNA的制備
    4.3 PCR擴(kuò)增制備目的基因
    4.4 PCR產(chǎn)物的克隆
    4.5 目的基因的初步表達(dá)
    4.6 目的基因表達(dá)產(chǎn)物的免疫學(xué)鑒定
五、 結(jié)果
    5.1 質(zhì)粒DNA圖譜
    5.2 TB32AgMPT64Ag基因的克隆與篩選
    5.3 重組質(zhì)粒的誘導(dǎo)表達(dá)及其表達(dá)產(chǎn)物的SDS-PAGE鑒定
    5. 4 重組表達(dá)產(chǎn)物的免疫學(xué)鑒定
    5.5 低分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線
六、 討論
    6.1 結(jié)核分支桿菌DNA提取方法探討
    6.2 各種Tag聚合酶性能探討
    6.3 原核系統(tǒng)表達(dá)探討
    6.4 重組菌蛋白表達(dá)的免疫學(xué)鑒定
    6.5 理論與實際意義
七、 全文小結(jié)
八、 參考文獻(xiàn)
九、 致謝



本文編號：4050455