發(fā)布時間：2025-06-26 06:29

　　哺乳動物卵泡發(fā)育包括卵泡的生長和卵泡閉鎖。卵泡的生長包括顆粒細(xì)胞的增殖、分化和周期的控制。然而,卵泡生長的過程中,只有少數(shù)的卵泡可以生長發(fā)育到排卵,大部分的卵泡在卵泡發(fā)育的過程中發(fā)生閉鎖。研究發(fā)現(xiàn),卵泡閉鎖退化的過程是由卵泡中顆粒細(xì)胞的凋亡觸發(fā)的,顆粒細(xì)胞的凋亡最終導(dǎo)致卵泡的閉鎖。在卵泡顆粒細(xì)胞中可以分泌類固醇激素、促卵泡素和促黃體素等激素,還可以產(chǎn)生一些細(xì)胞因子,調(diào)控著卵泡和卵母細(xì)胞的生長發(fā)育。因此體外培養(yǎng)顆粒細(xì)胞模型是研究卵泡發(fā)育過程中基因調(diào)控的分子機(jī)制的必須模型。而顆粒細(xì)胞的凋亡也是一個復(fù)雜的過程,凋亡機(jī)制尚不十分明確。本研究通過體外培養(yǎng)豬顆粒細(xì)胞,利用體外添加抑制劑培養(yǎng)、RNA干擾、western blot (WB)、real time PCR、流式細(xì)胞儀檢測、ELISA檢測等方法,研究MAPK-CEBPβ通路對豬顆粒細(xì)胞中關(guān)鍵基因的表達(dá)、顆粒細(xì)胞中類固醇激素的分泌、顆粒細(xì)胞的凋亡和周期及其它們的調(diào)控機(jī)制的影響,揭示MAPK-CEBPp對豬顆粒細(xì)胞生長發(fā)育調(diào)控機(jī)制,進(jìn)而獲得該通路通過對顆粒細(xì)胞的調(diào)控參與對豬卵泡發(fā)育排卵、顆粒細(xì)胞黃體化的調(diào)控機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)分為兩個部分： 實(shí)驗(yàn)一：...

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
摘要
Abstract
縮略詞（Abbreviation)
第一章 文獻(xiàn)綜述
    前言
    1 卵泡發(fā)育
    2 卵泡發(fā)育的調(diào)控
        2.1 生殖激素對卵泡發(fā)育的調(diào)節(jié)
            2.1.1 促性腺激素釋放激素
            2.1.2 促性腺激素
            2.1.3 類固醇激素
        2.2 細(xì)胞因子對卵泡發(fā)育的調(diào)節(jié)
            2.2.1 胰島素樣生長因子(IGF)
            2.2.2 表皮生長因子(EGF)
            2.2.3 轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)和腫瘤壞死因子(TNF)
    3 卵泡發(fā)育及排卵調(diào)控通路的研究
        3.1 MAPK-CEBPα/β信號通路在卵泡發(fā)育及排卵中的作用
        3.2 PKC信號通路在卵泡發(fā)育及排卵中的作用
        3.3 cAMP-PKA信號通路在卵泡發(fā)育及排卵中的作用
        3.4 鈣離子信號通路在卵泡發(fā)育及排卵中的作用
        3.6 其他相關(guān)因子在卵泡發(fā)育及排卵中的作用
    4 顆粒細(xì)胞凋亡
        4.1 細(xì)胞凋亡的概念
        4.3 細(xì)胞凋亡的生物學(xué)意義
        4.4 顆粒細(xì)胞凋亡的研究
        4.5 顆粒細(xì)胞與卵泡及卵母細(xì)胞發(fā)育
    5 研究目的與意義
第二章 U0126和RU486對豬卵泡顆粒細(xì)胞的作用及其機(jī)制研究
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.2 主要試劑盒
        2.2 方法
            2.2.1 豬卵泡顆粒細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和處理
            2.2.2 顆粒細(xì)胞總蛋白的提取
            2.2.3 顆粒細(xì)胞總RNA提取及檢測
            2.2.4 RT-PCR合成第一鏈cDNA
            2.2.5 顆粒細(xì)胞凋亡、周期、激素分泌相關(guān)基因的相對表達(dá)量分析
            2.2.6 Western blot分析
            2.2.7 U0126和RU486對豬顆粒細(xì)胞凋亡影響檢測
            2.2.8 U0126和RU486對豬顆粒細(xì)胞周期的影響檢測
            2.2.9 U0126和RU486對顆粒細(xì)胞中類固醇激素分泌量影響檢測
        2.3 統(tǒng)計分析
    3. 結(jié)果與分析
        3.1 LH/hCG對豬顆粒細(xì)胞中CEBPβ表達(dá)水平的影響
        3.2 U0126和RU486對豬顆粒細(xì)胞形態(tài)的影響
        3.3 U0126和RU486對CEBPβ及相關(guān)基因蛋白水平的影響
        3.4 FBS不影響U0126和RU486對豬顆粒細(xì)胞的作用
        3.5 U0126和RU486對p-p38MAPK蛋白表達(dá)的調(diào)控
        3.6 U0126和RU486顯著改變豬顆粒細(xì)胞周期
        3.7 U0126和RU486顯著影響豬顆粒細(xì)胞凋亡的變化
        3.8 U0126和RU486顯著降低豬顆粒細(xì)胞中類固醇激素分泌
        3.9 豬顆粒細(xì)胞總RNA檢測
        3.10 U0126和RU486對顆粒細(xì)胞CEBPβ mRNA水平的影響
        3.11 U0126和RU486對顆粒細(xì)胞中周期及凋亡相關(guān)基因mRNA水平的影響
        3.12 U0126和RU486對顆粒細(xì)胞中4個重要功能基因mRNA水平的影響
    4 討論分析
        4.1 LH和hCG顯著促進(jìn)顆粒細(xì)胞CEBPβ的表達(dá)
        4.2 U0126和RU486顯著影響CEBPβ和p-ERK1/2蛋白的表達(dá)
            4.2.1 U0126顯著降低豬顆粒細(xì)胞中CEBPβ蛋白的表達(dá)
            4.2.2 RU486顯著降低豬顆粒細(xì)胞中CEBPβ和p-ERK1/2蛋白的表達(dá)
        4.3 FBS不影響U0126和RU486對豬顆粒細(xì)胞的作用
        4.4 U0126和RU486可能通過p-p38MAPK調(diào)控CEBPβ的表達(dá)
        4.5 U0126和RU486顯著影響豬顆粒細(xì)胞的凋亡
            4.5.1 U0126抑制豬顆粒細(xì)胞的凋亡
            4.5.2 RU486促進(jìn)豬顆粒細(xì)胞的凋亡
            4.5.3 豬顆粒細(xì)胞凋亡基因的相對表達(dá)變化
        4.6 U0126和RU486顯著影響豬顆粒細(xì)胞周期的分布
            4.6.1 U0126顯著改變豬顆粒細(xì)胞周期的分布
            4.6.2 RU486顯著改變豬顆粒細(xì)胞周期的分布
            4.6.3 U0126和RU486顯著影響豬顆粒細(xì)胞周期調(diào)控基因的相對表達(dá)量
        4.7 U0126和RU486顯著降低豬顆粒細(xì)胞中類固醇激素水平
        4.8 U0126和RU486調(diào)控豬顆粒細(xì)胞中關(guān)鍵功能基因的表達(dá)
        4.9 U0126和RU486對豬顆粒細(xì)胞的的調(diào)控機(jī)制
    5 小結(jié)
第三章 干擾CEBPβ對豬卵泡顆粒細(xì)胞的影響及其機(jī)制研究
    1 引言
    2 材料與方法
        2.1 材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.2 干擾載體
            2.1.3 主要試劑盒
        2.2 方法
            2.2.1 豬卵泡顆粒細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
            2.2.2 CEBPβ基因RNAi重組干擾質(zhì)粒構(gòu)建
            2.2.3 重組質(zhì)�？寺〖凹兓�
            2.2.4 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染豬顆粒細(xì)胞
            2.2.5 顆粒細(xì)胞總蛋白的提取
            2.2.6 顆粒細(xì)胞總RNA提取及檢測
            2.2.7 RT-PCR合成第一鏈cDNA
            2.2.8 顆粒細(xì)胞中基因的相對表達(dá)量檢測
            2.2.9 Western blot分析
            2.2.10 顆粒細(xì)胞凋亡檢測
            2.2.11 顆粒細(xì)胞周期檢測
            2.2.12 顆粒細(xì)胞類固醇激素分泌量檢測
        2.3 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果與分析
        3.1 CEBPβ基因RNAi重組質(zhì)粒
        3.2 重組質(zhì)粒CEBPβ轉(zhuǎn)染豬顆粒細(xì)胞
        3.3 豬顆粒細(xì)胞總RNA提取檢測
        3.4 CEBPβRNAi重組質(zhì)粒干擾效率mRNA水平檢測
        3.5 CEBPβ RNAi后對CEBPβ及p-ERK1/2蛋白水平影響
        3.6 CEBPβ RNA干擾對激素分泌水平及調(diào)控的影響
        3.7 CEBPβ RNA干擾對豬顆粒細(xì)胞周期的影響
        3.8 CEBPβ RNA干擾對豬顆粒細(xì)胞凋亡的影響
        3.9 CEBPβ RNA干擾對顆粒細(xì)胞周期及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響
        3.10 CEBPβ RNA對顆粒細(xì)胞中4個重要功能基因表達(dá)的影響
    4 討論分析
        4.1 CEBPβ基因RNAi效果顯著
        4.2 CEBPβ干擾后增加p-ERK1/2的蛋白表達(dá),降低ERK2蛋白表達(dá)
        4.3 CEBPβ對豬顆粒細(xì)胞凋亡的影響
        4.4 CEBPβ顯著改變豬顆粒細(xì)胞周期的分布
        4.5 CEBPβ顯著提高豬顆粒細(xì)胞類固醇激素水平
        4.6 CEBPβ顯著影響豬顆粒細(xì)胞中關(guān)鍵功能基因的表達(dá)
        4.7 CEBPβ促進(jìn)顆粒細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制
    5 小結(jié)
全文結(jié)論
創(chuàng)新與不足
參考文獻(xiàn)
已發(fā)表論文
致謝



本文編號：4053309