發(fā)布時(shí)間：2025-06-19 03:26

　　實(shí)驗(yàn)背景:神經(jīng)膠質(zhì)瘤作為在腦部和脊髓中廣泛存在的腫瘤,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中占到40%,年發(fā)病率高達(dá)3-8人每10萬(wàn)人。Tagln3在神經(jīng)元發(fā)育和多種精神疾病與神經(jīng)疾病上都扮演著重要作用,有文獻(xiàn)報(bào)道和臨床分析數(shù)據(jù)顯示,Tagln3在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中相比正常的腦組織處在低表達(dá)水平。故Tagln3在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中可能發(fā)揮一定的調(diào)控作用,其背后的機(jī)制有助于了解中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病與腫瘤發(fā)生之間的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果:我們使用Western Blot和qPCR的方法檢測(cè)了 Tagln3在小鼠組織中的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)Tagln3在腦組織中特異性表達(dá)。同樣在正常膠質(zhì)細(xì)胞HEB和三種膠質(zhì)瘤細(xì)胞GBM、U251和U87中檢測(cè)了 Tagln3的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)Tagln3在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中低表達(dá)。使用pEGFP-C1質(zhì)粒構(gòu)建了 Tagln3的真核表達(dá)載體。在U251細(xì)胞中過(guò)表達(dá)Tagln3能夠抑制細(xì)胞的增殖,而用siRNA敲降Tagln3的表達(dá)促進(jìn)了細(xì)胞的增殖。用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Tagln3對(duì)U251細(xì)胞周期的影響,發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)Tagln3能使U251細(xì)胞發(fā)生S期阻滯,從而抑制細(xì)胞的增殖。流式細(xì)胞儀檢測(cè)過(guò)表達(dá)Tagln3對(duì)U2...

【文章頁(yè)數(shù)】：80 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 神經(jīng)膠質(zhì)瘤概述
    1.2 Tagln3概述
        1.2.1 Tagln3蛋白結(jié)構(gòu)
        1.2.2 Tagln3的功能及作用機(jī)制
        1.2.3 Tagln3與腦部疾病
        1.2.4 Tagln3與神經(jīng)膠質(zhì)瘤
    1.3 研究的目的與意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 小鼠組織、細(xì)胞系、質(zhì)粒、siRNA、感受態(tài)細(xì)胞及cDNA
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與耗材
        2.1.4 試劑和溶液的配置
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)時(shí)定量PCR
        2.2.2 Western Blot蛋白印跡法
        2.2.3 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.4 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.2.6 MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期
        2.2.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.2.9 尋找相互作用蛋白
        2.2.10 細(xì)胞劃痕遷移實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
    3.1 Tagln3的表達(dá)分析
        3.1.1 Tagln3在小鼠組織中表達(dá)情況
        3.1.2 Tagln3在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的表達(dá)情況
    3.2 pEGFP-C1-Tagln3質(zhì)粒載體的構(gòu)建
    3.3 小干擾RNA敲降Tagln3效率驗(yàn)證
    3.4 Tagln3對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的影響
        3.4.1 Tagln3對(duì)U251增殖的影響
        3.4.2 Tagln3對(duì)U251細(xì)胞周期的影響
        3.4.3 Tagln3對(duì)U251細(xì)胞凋亡的影響
    3.5 尋找Tagln3在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251中的相互作用蛋白
        3.5.1 pGEX-4T1-Tagln3原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.5.2 GST-Tagln3蛋白純化
        3.5.3 在U251細(xì)胞中用GST large scale pull down尋找相互作用蛋白
    3.6 Tagln3與eEF1A2相互作用
        3.6.1 eEF1A2概述
        3.6.2 Tagln3與eEF1A2相關(guān)性分析
        3.6.3 pEGFP-C1-eEF1A2質(zhì)粒載體的構(gòu)建
        3.6.4 GST pull down驗(yàn)證Tagln3與eEF1A2的相互作用
        3.6.5 過(guò)表達(dá)或敲降Tagln3對(duì)eEF1A2蛋白表達(dá)的影響
    3.7 小干擾RNA對(duì)eEF1A2敲降效率的驗(yàn)證
    3.8 Tagln3與eEF1A2相互作用對(duì)U251細(xì)胞增殖的影響
    3.9 探索Tagln3在U251細(xì)胞中的調(diào)控通路
        3.9.1 腫瘤相關(guān)信號(hào)通路
        3.9.2 microRNA對(duì)Tagln3的調(diào)控作用
第四章 總結(jié)和展望
    4.1 總結(jié)
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
碩士期間科研成果
致謝



本文編號(hào)：4050782