發(fā)布時間：2025-06-20 04:21

　　在人類神經網絡中,神經元之間的信號傳輸是由神經遞質介導的,而神經遞質的釋放是由突觸囊泡融合調控的。在突觸囊泡融合過程中,syntaxin-1A、VAMP2和SNAP-25這三個可溶性N-乙基馬來酰亞胺敏感因子附著蛋白受體（SolubleN-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor,SNARE）蛋白通過它們的SNARE區(qū)域相互結合形成SNARE復合物,在許多蛋白及因子共同調控下,突觸囊泡與突觸前膜融合,最終完成神經遞質的釋放。膜融合的調控過程極其復雜,目前仍有一些調控蛋白的機制尚未解釋清楚。由于真核細胞中膜融合機制的高度保守性,酵母細胞與人體細胞共享SNARE膜融合機制,其中syntaxin-1A、VAMP2和SNAP-25的直系同源蛋白Sso1/2、Snc1/2和Sec9在酵母胞外分泌過程中形成SNARE復合物并調控這個過程。人類神經遞質釋放受到抑制會引起各種神經性疾病,而酵母的胞外分泌過程受到抑制會影響酵母的生長�；�于酵母基因操作簡單、生長周期短等優(yōu)點,可以將人類的神經元膜融合過程重構到酵母中,在酵母中研究神...

【文章頁數】：115 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞索引表
第一章 緒論
    1.1 概述
        1.1.1 突觸囊泡的循環(huán)
        1.1.2 囊泡膜融合機制-SNARE假說
    1.2 參與調控囊泡融合過程的幾種重要蛋白的概述
        1.2.1 SNARE蛋白
        1.2.2 SM蛋白
        1.2.3 Tomosyn蛋白
    1.3 肉毒神經毒素
        1.3.1 肉毒神經毒素的概述
        1.3.2 BoNTs的分子結構
        1.3.3 BoNTs神經末梢中毒的機制
    1.4 人源化酵母概述
    1.5 本論文的研究意義和內容
        1.5.1 立題依據及研究意義
        1.5.2 論文主要研究內容
第二章 Sso1/STX1A不能替換Sso1和Sso2 功能的原因分析
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 菌株和質粒
        2.2.2 試劑和儀器
        2.2.3 培養(yǎng)基
        2.2.4 分子生物學操作
    2.3 結果
        2.3.1 Sso1/STX1A重組蛋白在酵母中功能的驗證
        2.3.2 Sso1和Sso1/STX1A重組蛋白在酵母中蛋白表達水平分析
        2.3.3 Sso1和Sso1/STX1A重組蛋白熒光定位分析
        2.3.4 突變發(fā)生在SSO1的Habc區(qū)域的Sso1/STX1A突變體的篩選
        2.3.5 Sso1/STX1A^D133V蛋白表達水平以及熒光定位的分析
    2.4 討論
    2.5 本章小結
第三章 syntaxin家族SNARE蛋白的特性分析
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 菌株和質粒
        3.2.2 試劑和儀器
        3.2.3 培養(yǎng)基
        3.2.4 分子生物學操作
    3.3 結果
        3.3.1 Sso1/STX1A重組蛋白在ER中與Snc1和Sec9 相互作用的研究
        3.3.2 異常SNARE復合體的形成是否導致Sso1/STX1A運輸缺陷的分析
        3.3.3 Syntaxin-1A的 SNARE區(qū)域是否與Snc1和Sec9 發(fā)生相互作用的分析.
        3.3.4 A220E突變能否破壞syntaxin-1A SNARE區(qū)域形成異常SNARE復合體的特性的分析
        3.3.5 Munc-18 能否阻止syntaxin-1A形成異常SNARE復合體的分析
        3.3.6 Syntaxin-1A以及Sso1的SNARE區(qū)域能否發(fā)生自身相互作用的分析
    3.4 討論
    3.5 本章小結
第四章 5-FOA藥物篩選獲得Sso1/STX1A能替換Sso1和Sso2 功能的酵母突變菌株及其分析
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 菌株和質粒
        4.2.2 試劑和儀器
        4.2.3 培養(yǎng)基
        4.2.4 分子生物學操作
    4.3 結果與討論
        4.3.1 5-FOA藥物篩選Sso1/STX1A重組蛋白功能回補的sso1?sso2?雙敲除菌株
        4.3.2 孢子四分體拆分法分離所得菌株中的突變
        4.3.3 酵母全基因組測序結果及其分析
        4.3.4 所得候選突變基因的功能在sso1?sso2?雙敲除菌株中的回補驗證
        4.3.5 GFA1 突變體對Sso1/STX1A重組蛋白熒光定位的影響
        4.3.6 GFA1基因G373D突變引起細胞壁幾丁質含量上升
        4.3.7 殼聚糖合成途徑其他基因過表達對sso1?sso2?雙敲除菌株生長的影響
        4.3.8 Gfa1 的人源直系同源蛋白GFAT1 在酵母中的研究
    4.4 本章小結
第五章 利用人源化酵母模型分析BoNT/C輕鏈活性
    5.1 前言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 菌株和質粒
        5.2.2 試劑和儀器
        5.2.3 培養(yǎng)基
        5.2.4 分子生物學操作
    5.3 結果
        5.3.1 BoNT/C的表達對野生型酵母生長影響的分析
        5.3.2 BoNT/C在酵母中活性的驗證
        5.3.3 Bo NT/C的表達對含有Sso1/STX1A^D133V的sso1?sso2?雙敲除酵母生長影響的分析
        5.3.4 不同Sso1/STX1A重組蛋白對Bo NT/C敏感性的驗證
    5.4 討論
    5.5 本章小結
第六章 建立一個用于tomosyn功能分析的酵母模型
    6.1 前言
    6.2 材料與方法
        6.2.1 菌株和質粒
        6.2.2 試劑和儀器
        6.2.3 培養(yǎng)基
        6.2.4 分子生物學操作
    6.3 結果與討論
        6.3.1 過表達tomosyn對野生型酵母生長影響的分析
        6.3.2 過表達tomosyn對含有Sso1/STX1A^D133V的sso1?sso2?雙敲除酵母生長影響的分析
        6.3.3 Tomosyn和 syntaxin-1A在酵母中的相互作用分析
        6.3.4 Syntaxin-1A與 tomosyn結合所需要區(qū)域的分析
    6.4 本章小結
主要結論與展望
    主要結論
    展望
論文創(chuàng)新點
致謝
參考文獻
附錄 :作者在攻讀博士學位期間發(fā)表的論文



本文編號：4051416