發(fā)布時間：2020-12-03 17:05

　　目的 構(gòu)建銅綠假單胞菌重組（r）兩歧雙歧桿菌（Bb）疫苗,研究疫苗免疫后銅綠假單胞菌攻擊小鼠的免疫保護(hù)力。方法 將PCR擴增的銅綠假單胞菌重組外膜蛋白H（OprH）基因克隆至載體pGEX-1λT,電穿孔轉(zhuǎn)化兩歧雙歧桿菌,得到rBb-pGEX-OprH疫苗。將疫苗進(jìn)行PCR鑒定,再以異丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分析,并行蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot）鑒定。將21只BALB/c小鼠按照隨機數(shù)字表法分為rBb-pGEX-OprH疫苗組（簡稱疫苗組）、空載體組和Bb對照組（每組7只）,分別用rBb-pGEX-OprH、rBb-pGEX-1λT或Bb行灌胃免疫,每天1次,連續(xù)3 d,持續(xù)3周,于首次免疫后4周以5 × 107菌簇形成單位（CFU）銅綠假單胞菌滴鼻攻擊,每天1次,連續(xù)3 d。攻擊2周后處死小鼠,計數(shù)肺細(xì)菌負(fù)荷。另于免疫前、首次免疫后4周、攻擊感染后2周取靜脈血,酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法測定小鼠血清IgG水平。結(jié)果 PCR擴增出660 bp的OprH基因；PCR鑒定顯示,rBb-... 

【文章來源】：中華地方病學(xué)雜志. 2019年01期 第31-35頁

【文章頁數(shù)】：5 頁

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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