發(fā)布時(shí)間：2024-06-03 00:24

　　目的： 1.構(gòu)建帶有雌激素受體編碼區(qū)的KLF4真核表達(dá)載體,并篩選出對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7形成穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株,觀察經(jīng)Tamoxifen誘導(dǎo)的重組載體是否可入胞核內(nèi)表達(dá)。 2.觀察KLF4基因?qū)π∈缶奘杉?xì)胞系Raw264.7細(xì)胞向破骨分化及其功能的影響,并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探討。 3.探討使用CD11b-Cre小鼠和KLF4loxp小鼠雜交后得到在破骨前體細(xì)胞及破骨細(xì)胞中特異性敲除KLF4轉(zhuǎn)基因小鼠模型的可行性,了解KLF4敲除后的破骨前體細(xì)胞對(duì)破骨分化及其功能的影響。 方法： 1.擴(kuò)增KLF4全長(zhǎng)片段,將改良型小鼠雌激素受體(oestrogen receptor, ER)的激素鏈接區(qū)(hormone binding domain, HBD)(MOR G525R)序列與之融合后插入pCGF5-IEGZ載體中,轉(zhuǎn)染并篩選穩(wěn)定表達(dá)的RAW264.7細(xì)胞株,流式細(xì)胞儀檢測(cè)篩選的轉(zhuǎn)染效率,Q-PCR及Western blot檢測(cè)KLF4的表達(dá)；DAPI核染色觀察經(jīng)Tamoxifen誘導(dǎo)后重組載體轉(zhuǎn)運(yùn)胞核中的表達(dá)情況。 2. Realtime-PCR及Western blot檢測(cè)正常RA...

【文章頁(yè)數(shù)】：106 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
目錄
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一部分
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄一
附錄二
致謝



本文編號(hào)：3987897