發(fā)布時(shí)間：2018-10-07 21:24

【摘要】：目的探討豬小腸黏膜下層細(xì)胞外基質(zhì)(porcine small intestinal submucosa extracellular matrix,PSISM)對(duì)肝細(xì)胞活力及相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控,為PSISM應(yīng)用于肝臟組織工程提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法實(shí)驗(yàn)分為兩部分。(1)取PSISM添加至含10%FBS的H-DMEM培養(yǎng)基中,制備終濃度為50、100、200μg/m L的PSISM培養(yǎng)基;將大鼠肝細(xì)胞系BRL細(xì)胞分別用以上濃度PSISM培養(yǎng)基培養(yǎng)(A1、B1、C1組),以單純H-DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)作為對(duì)照(D1組)。(2)取PSISM溶解于含0.1 mol/L Na OH的PBS無(wú)菌溶液中,調(diào)整溶液濃度為1%、2%、3%,制備PSISM凝膠;將BRL細(xì)胞分別接種于以上濃度PSISM凝膠進(jìn)行培養(yǎng)(A2、B2、C2組),鼠尾Ⅰ型膠原凝膠作為對(duì)照(D2組)。培養(yǎng)后第1、3、5天,采用Live/Dead熒光染色觀察細(xì)胞形態(tài)及存活情況,細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)試劑盒(cell counting kit-8,CCK-8)檢測(cè)細(xì)胞活力,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)肝細(xì)胞特異基因白蛋白(albumin,ALB)、細(xì)胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)和甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)的表達(dá)。結(jié)果 Live/Dead熒光染色顯示各組細(xì)胞均存活良好。細(xì)胞活力檢測(cè)顯示,PSISM培養(yǎng)基培養(yǎng)后,第5天C1組吸光度(A)值顯著高于D1組(P0.05),其余各時(shí)間點(diǎn)各組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);PSISM凝膠培養(yǎng)后,A2、B2、C2組第3天和第5天A值顯著高于D2組(P0.05),A2組第5天A值顯著高于B2、C2組(P0.05),其余各時(shí)間點(diǎn)各組間比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)顯示,A1、B1、C1組ALB、CK18基因相對(duì)表達(dá)量較D1組顯著增高(P0.05)、AFP基因相對(duì)表達(dá)量降低(P0.05),C1組CK18基因相對(duì)表達(dá)量顯著低于A1、B1組(P0.05);A2、B2、C2組ALB、CK18基因相對(duì)表達(dá)量較D2組顯著增高(P0.05)、AFP基因相對(duì)表達(dá)量降低(P0.05),A2組CK18基因相對(duì)表達(dá)量顯著高于B2組(P0.05)、AFP基因相對(duì)表達(dá)量顯著低于C2組(P0.05)。其余各組間各基因相對(duì)量表達(dá)比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論 PSISM無(wú)毒性,對(duì)肝細(xì)胞有良好相容性,能促進(jìn)肝細(xì)胞活力和功能基因表達(dá),有望作為細(xì)胞培養(yǎng)添加物或細(xì)胞移植載體用于肝臟組織工程。
[Abstract]:%E7%9B%AE%E7%9A%84%E6%8E%A2%E8%AE%A8%E7%8C%AA%E5%B0%8F%E8%82%A0%E9%BB%8F%E8%86%9C%E4%B8%8B%E5%B1%82%E7%BB%86%E8%83%9E%E5%A4%96%E5%9F%BA%E8%B4%A8%28porcine%20small%20intestinal%20submucosa%20extracellular%20matrix%2CPSISM%29%E5%AF%B9%E8%82%9D%E7%BB%86%E8%83%9E%E6%B4%BB%E5%8A%9B%E5%8F%8A%E7%9B%B8%E5%85%B3%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E7%9A%84%E8%B0%83%E6%8E%A7%2C%E4%B8%BAPSISM%E5%BA%94%E7%94%A8%E4%BA%8E%E8%82%9D%E8%84%8F%E7%BB%84%E7%BB%87%E5%B7%A5%E7%A8%8B%E6%8F%90%E4%BE%9B%E5%AE%9E%E9%AA%8C%E4%BE%9D%E6%8D%AE.%E6%96%B9%E6%B3%95%E5%AE%9E%E9%AA%8C%E5%88%86%E4%B8%BA%E4%B8%A4%E9%83%A8%E5%88%86.%281%29%E5%8F%96PSISM%E6%B7%BB%E5%8A%A0%E8%87%B3%E5%90%AB10%FBS%E7%9A%84H-DMEM%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BA%E4%B8%AD%2C%E5%88%B6%E5%A4%87%E7%BB%88%E6%B5%93%E5%BA%A6%E4%B8%BA50%2C100%2C200%CE%BCg%2Fm%20L%E7%9A%84PSISM%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BA%3B%E5%B0%86%E5%A4%A7%E9%BC%A0%E8%82%9D%E7%BB%86%E8%83%9E%E7%B3%BBBRL%E7%BB%86%E8%83%9E%E5%88%86%E5%88%AB%E7%94%A8%E4%BB%A5%E4%B8%8A%E6%B5%93%E5%BA%A6PSISM%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BA%E5%9F%B9%E5%85%BB%28A1%2CB1%2CC1%E7%BB%84%29%2C%E4%BB%A5%E5%8D%95%E7%BA%AFH-DMEM%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BA%E5%9F%B9%E5%85%BB%E4%BD%9C%E4%B8%BA%E5%AF%B9%E7%85%A7%28D1%E7%BB%84%29.%282%29%E5%8F%96PSISM%E6%BA%B6%E8%A7%A3%E4%BA%8E%E5%90%AB0.1%20mol%2FL%20Na%20OH%E7%9A%84PBS%E6%97%A0%E8%8F%8C%E6%BA%B6%E6%B6%B2%E4%B8%AD%2C%E8%B0%83%E6%95%B4%E6%BA%B6%E6%B6%B2%E6%B5%93%E5%BA%A6%E4%B8%BA1%25%2C2%25%2C3%25%2C%E5%88%B6%E5%A4%87PSISM%E5%87%9D%E8%83%B6%3B%E5%B0%86BRL%E7%BB%86%E8%83%9E%E5%88%86%E5%88%AB%E6%8E%A5%E7%A7%8D%E4%BA%8E%E4%BB%A5%E4%B8%8A%E6%B5%93%E5%BA%A6PSISM%E5%87%9D%E8%83%B6%E8%BF%9B%E8%A1%8C%E5%9F%B9%E5%85%BB%28A2%2CB2%2CC2%E7%BB%84%29%2C%E9%BC%A0%E5%B0%BE%E2%85%A0%E5%9E%8B%E8%83%B6%E5%8E%9F%E5%87%9D%E8%83%B6%E4%BD%9C%E4%B8%BA%E5%AF%B9%E7%85%A7%28D2%E7%BB%84%29.%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%90%8E%E7%AC%AC1%2C3%2C5%E5%A4%A9%2C%E9%87%87%E7%94%A8Live%2FDead%E8%8D%A7%E5%85%89%E6%9F%93%E8%89%B2%E8%A7%82%E5%AF%9F%E7%BB%86%E8%83%9E%E5%BD%A2%E6%80%81%E5%8F%8A%E5%AD%98%E6%B4%BB%E6%83%85%E5%86%B5%2C%E7%BB%86%E8%83%9E%E5%A2%9E%E6%AE%96-%E6%AF%92%E6%80%A7%E6%A3%80%E6%B5%8B%E8%AF%95%E5%89%82%E7%9B%92%28cell%20counting%20kit-8%2CCCK-8%29%E6%A3%80%E6%B5%8B%E7%BB%86%E8%83%9E%E6%B4%BB%E5%8A%9B%2C%E5%AE%9E%E6%97%B6%E8%8D%A7%E5%85%89%E5%AE%9A%E9%87%8FPCR%E6%A3%80%E6%B5%8B%E8%82%9D%E7%BB%86%E8%83%9E%E7%89%B9%E5%BC%82%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E7%99%BD%E8%9B%8B%E7%99%BD%28albumin%2CALB%29%2C%E7%BB%86%E8%83%9E%E8%A7%92%E8%9B%8B%E7%99%BD18%28cytokeratin%2018%2CCK18%29%E5%92%8C%E7%94%B2%E8%83%8E%E8%9B%8B%E7%99%BD%28alpha-fetoprotein%2CAFP%29%E7%9A%84%E8%A1%A8%E8%BE%BE.%E7%BB%93%E6%9E%9C%20Live%2FDead%E8%8D%A7%E5%85%89%E6%9F%93%E8%89%B2%E6%98%BE%E7%A4%BA%E5%90%84%E7%BB%84%E7%BB%86%E8%83%9E%E5%9D%87%E5%AD%98%E6%B4%BB%E8%89%AF%E5%A5%BD.%E7%BB%86%E8%83%9E%E6%B4%BB%E5%8A%9B%E6%A3%80%E6%B5%8B%E6%98%BE%E7%A4%BA%2CPSISM%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%9F%BA%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%90%8E%2C%E7%AC%AC5%E5%A4%A9C1%E7%BB%84%E5%90%B8%E5%85%89%E5%BA%A6%28A%29%E5%80%BC%E6%98%BE%E8%91%97%E9%AB%98%E4%BA%8ED1%E7%BB%84%28P0.05%29%2C%E5%85%B6%E4%BD%99%E5%90%84%E6%97%B6%E9%97%B4%E7%82%B9%E5%90%84%E7%BB%84%E9%97%B4%E6%AF%94%E8%BE%83%E5%B7%AE%E5%BC%82%E5%9D%87%E6%97%A0%E7%BB%9F%E8%AE%A1%E5%AD%A6%E6%84%8F%E4%B9%89%28P0.05%29%3BPSISM%E5%87%9D%E8%83%B6%E5%9F%B9%E5%85%BB%E5%90%8E%2CA2%2CB2%2CC2%E7%BB%84%E7%AC%AC3%E5%A4%A9%E5%92%8C%E7%AC%AC5%E5%A4%A9A%E5%80%BC%E6%98%BE%E8%91%97%E9%AB%98%E4%BA%8ED2%E7%BB%84%28P0.05%29%2CA2%E7%BB%84%E7%AC%AC5%E5%A4%A9A%E5%80%BC%E6%98%BE%E8%91%97%E9%AB%98%E4%BA%8EB2%2CC2%E7%BB%84%28P0.05%29%2C%E5%85%B6%E4%BD%99%E5%90%84%E6%97%B6%E9%97%B4%E7%82%B9%E5%90%84%E7%BB%84%E9%97%B4%E6%AF%94%E8%BE%83%E5%B7%AE%E5%BC%82%E5%9D%87%E6%97%A0%E7%BB%9F%E8%AE%A1%E5%AD%A6%E6%84%8F%E4%B9%89%28P0.05%29.%E5%AE%9E%E6%97%B6%E8%8D%A7%E5%85%89%E5%AE%9A%E9%87%8FPCR%E6%A3%80%E6%B5%8B%E6%98%BE%E7%A4%BA%2CA1%2CB1%2CC1%E7%BB%84ALB%2CCK18%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E7%9B%B8%E5%AF%B9%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E9%87%8F%E8%BE%83D1%E7%BB%84%E6%98%BE%E8%91%97%E5%A2%9E%E9%AB%98%28P0.05%29%2CAFP%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E7%9B%B8%E5%AF%B9%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E9%87%8F%E9%99%8D%E4%BD%8E%28P0.05%29%2CC1%E7%BB%84CK18%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E7%9B%B8%E5%AF%B9%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E9%87%8F%E6%98%BE%E8%91%97%E4%BD%8E%E4%BA%8EA1%2CB1%E7%BB%84%28P0.05%29%3BA2%2CB2%2CC2%E7%BB%84ALB%2CCK18%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E7%9B%B8%E5%AF%B9%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E9%87%8F%E8%BE%83D2%E7%BB%84%E6%98%BE%E8%91%97%E5%A2%9E%E9%AB%98%28P0.05%29%2CAFP%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E7%9B%B8%E5%AF%B9%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E9%87%8F%E9%99%8D%E4%BD%8E%28P0.05%29%2CA2%E7%BB%84CK18%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E7%9B%B8%E5%AF%B9%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E9%87%8F%E6%98%BE%E8%91%97%E9%AB%98%E4%BA%8EB2%E7%BB%84%28P0.05%29%2CAFP%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E7%9B%B8%E5%AF%B9%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E9%87%8F%E6%98%BE%E8%91%97%E4%BD%8E%E4%BA%8EC2%E7%BB%84%28P0.05%29.%E5%85%B6%E4%BD%99%E5%90%84%E7%BB%84%E9%97%B4%E5%90%84%E5%9F%BA%E5%9B%A0%E7%9B%B8%E5%AF%B9%E9%87%8F%E8%A1%A8%E8%BE%BE%E6%AF%94%E8%BE%83%2C%E5%B7%AE%E5%BC%82%E5%9D%87%E6%97%A0%E7%BB%9F%E8%AE%A1%E5%AD%A6%E6%84%8F%E4%B9%89%28P0.05%29.%E7%BB%93%E8%AE%BA%20PSIS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【作者單位】： 四川大學(xué)華西醫(yī)院再生醫(yī)學(xué)研究中心干細(xì)胞與組織工程研究室;
【基金】：四川省科技支撐計(jì)劃資助項(xiàng)目(2013SZ0088)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R657.3

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本文編號(hào)：2255723