發(fā)布時間：2018-12-27 08:56

【摘要】：研究背景及目的： 目前認為糖尿病性視網(wǎng)膜病變（Diabetic retinopathy，DR）是以氧化應(yīng)激增多為基礎(chǔ)機制的微血管病變（新生血管的發(fā)生和發(fā)展），但是具體機制尚未闡明。近年的研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者和/或動物體內(nèi)血清鋅普遍降低，體內(nèi)組織金屬硫蛋白（Metallothionein，MT）反應(yīng)性上調(diào)發(fā)生在糖尿病誘發(fā)組織損傷之后，這種組織損傷將誘導(dǎo)MT表達，同時抑制其病理改變，阻止組織進一步損傷，減緩糖尿病組織損傷的進展速度；鋅及MT是重要的抗氧化劑，而且鋅是金屬硫蛋白的重要誘導(dǎo)劑，通過補鋅誘導(dǎo)MT上調(diào)，可以有效抑制糖尿病心肌病及糖尿病腎病的氧化損傷已經(jīng)被證實。 本實驗通過建立STZ糖尿病大鼠模型，觀察補鋅治療后大鼠視網(wǎng)膜組織血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）、及金屬硫蛋白（MT）免疫組織化學(xué)染色積分光密度（Integrated optical density，IOD）及采用透射電鏡技術(shù)觀察大鼠視網(wǎng)膜組織毛細血管超微結(jié)構(gòu)的變化，研究鋅、VEGF、MT與氧化應(yīng)激在糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的關(guān)系，觀察補鋅是否能夠抑制視網(wǎng)膜組織VEGF的表達及誘導(dǎo)MT的表達上調(diào)從而達到抑制DR氧化應(yīng)激導(dǎo)致的損傷。探討鋅、VEGF、 MT與氧化應(yīng)激在DR中的關(guān)系，為延緩或治療DR提供新思路。 研究內(nèi)容和方法： （1）STZ糖尿病動物模型的建立。 （2）將所有實驗動物分為：正常對照組、糖尿病組、正常補鋅組、糖尿病補鋅組。正常對照組（N）：每日生理鹽水5mg/kg灌胃；糖尿病組（G）：每日生理鹽水5mg/kg灌胃；正常補鋅組（N+Zn）：每日0.1%硫酸鋅溶液5mg/kg灌胃；糖尿病補鋅組（G+Zn）：每日0.1%硫酸鋅溶液5mg/kg灌胃。 （3）標(biāo)本的制備：石蠟切片及透射電鏡標(biāo)本制備。 （4）視網(wǎng)膜VEGF、MT免疫組織化學(xué)染色（PS法），結(jié)果判定：以在細胞的胞質(zhì)、胞漿部位出現(xiàn)棕黃色顆粒者判定為陽性，而細胞核被染為藍色。 （5）JEM-1200EX透射電鏡觀察視網(wǎng)膜毛細血管超微結(jié)構(gòu)。 （6）圖像采集，數(shù)據(jù)整理，進行統(tǒng)計學(xué)分析。 研究結(jié)果： 大鼠視網(wǎng)膜免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：1、正常對照組、正常補鋅組、糖尿病組、糖尿病補鋅組各組視網(wǎng)膜組織中VEGF免疫組織化學(xué)染色積分光密度（IOD）均值之間比較差異具有顯著性（F=10.339，P�d0.05），糖尿病組明顯比正常對照組、正常補鋅組、糖尿病補鋅組高；正常對照組分別與正常補鋅組、糖尿病組、糖尿病補鋅組大鼠視網(wǎng)膜VEGF表達IOD值比較：正常對照組與糖尿病組比較差異具有顯著性（P0.05），正常對照組與正常補鋅組、糖尿病補鋅組比較差異無顯著性（P�e0.05）；糖尿病組分別與正常對照組、正常補鋅組、糖尿病補鋅組大鼠視網(wǎng)膜VEGF表達IOD值比較差異均具有顯著性（P0.05）。2、各組視網(wǎng)膜組織中MT免疫組織化學(xué)染色積分光密度（IOD）均值之間比較差異具有顯著性（F=6.509，P=0.003�d0.05），糖尿病補鋅組明顯高于正常對照組、正常補鋅組、糖尿病組；正常對照組與正常補鋅組、糖尿病組之間比較差異無顯著性（P＞0.05），正常對照組與糖尿病補鋅組之間比較差異具有顯著性（P�d0.05）；糖尿病組與正常對照組、正常補鋅組之間比較差異無顯著性（P�e0.05），糖尿病組與糖尿病補鋅組之間比較差異具有顯著性（P�d0.05）。 大鼠視網(wǎng)膜組織透射電鏡觀察結(jié)果顯示：正常對照組、正常補鋅組視網(wǎng)膜毛細血管內(nèi)皮細胞、周細胞各自的核及胞質(zhì)內(nèi)各細胞器形態(tài)正常；內(nèi)皮細胞壁彼此呈疊瓦狀或指狀突起形成緊密連接，他們被周細胞包繞，內(nèi)皮細胞及周細胞基膜完整，電子密度均勻一致。糖尿病組視網(wǎng)膜毛細血管管壁增厚，管腔狹窄，甚至閉塞，內(nèi)皮細胞基膜及周細胞基膜增厚，斷裂缺失，電子密度不均；內(nèi)皮細胞核形態(tài)變的不規(guī)則，異染色質(zhì)靠邊聚集，，胞質(zhì)中線粒體空化，脊斷裂，緊密連接被破壞，周細胞胞質(zhì)線粒體空化，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張，血管周圍的視網(wǎng)膜組織水腫。糖尿病補鋅組視網(wǎng)膜毛細血管管壁較糖尿病組變薄，管腔狹窄明顯減輕，內(nèi)皮細胞基膜及周細胞基膜較糖尿病組變薄，內(nèi)皮細胞及周細胞胞質(zhì)線粒體正常，或僅存輕度空化。 研究結(jié)論： （1）糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織VEGF表達顯著升高； （2）糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織MT表達略升高； （3）補鋅可以抑制糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織VEGF表達升高，誘導(dǎo)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織MT表達顯著上調(diào)； （4）補鋅可以改善糖尿病大鼠視網(wǎng)膜毛細血管超微結(jié)構(gòu)的損害。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R774.1

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本文編號：2392816