發(fā)布時間：2025-06-18 22:54

　　 旨在通過干擾或過表達盤狀蛋白結(jié)構(gòu)域受體1(DDR1)基因,探討其對奶牛乳腺上皮細胞增殖、凋亡及周期的影響。本研究將DDR1基因小干擾RNA片段和過表達載體pcDNA3.1-DDR1轉(zhuǎn)染奶牛乳腺上皮細胞,采用qRT-PCR和Western blot檢測細胞中DDR1的干擾和過表達效果;利用CCK-8法檢測細胞增殖能力;流式細胞術(shù)檢測細胞周期和細胞凋亡(早凋、晚凋)的變化;利用qRT-PCR檢測增殖與凋亡相關(guān)基因的表達情況。結(jié)果,在奶牛乳腺上皮細胞中干擾DDR1基因后,其mRNA和蛋白表達分別下調(diào)94%和30%,而過表達DDR1基因后,其mRNA和蛋白表達分別上調(diào)68.24和1.38倍;干擾DDR1極顯著抑制細胞的增殖(P<0.01),細胞早凋與晚凋比例極顯著上升(P<0.01);干擾組G1期細胞比例極顯著上升(P<0.01),S期細胞比例極顯著下降(P<0.01),G2期細胞比例顯著下降(P<0.05),提示細胞阻滯在G0/G1期。相反,過表達DDR1能顯著促進細胞增殖(P<0.05),顯著抑制細胞晚期凋亡(P<0.05),G1期細胞比例極顯著下...

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑及材料
    1.2 方法
        1.2.1 奶牛乳腺上皮細胞的培養(yǎng)
        1.2.2 奶牛DDR1基因干擾片段的合成及轉(zhuǎn)染
        1.2.3 pcDNA3.1-DDR1過表達載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染
        1.2.4 奶牛DDR1基因及增殖凋亡相關(guān)基因定量引物的設(shè)計與合成
        1.2.5 奶牛乳腺上皮細胞DDR1基因PCR擴增及電泳
        1.2.6 qRT-PCR檢測DDR1及增殖凋亡相關(guān)基因表達
        1.2.7 Western blot檢測DDR1的蛋白表達水平
        1.2.8 CCK-8法檢測奶牛乳腺上皮細胞增殖
        1.2.9 流式細胞術(shù)檢測奶牛乳腺上皮細胞周期
        1.2.10 流式細胞術(shù)檢測奶牛乳腺上皮細胞凋亡
        1.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
2 結(jié) 果
    2.1 DDR1在奶牛乳腺上皮細胞中的表達
    2.2 奶牛乳腺上皮細胞中DDR1的干擾和過表達效果檢測
    2.3 干擾、過表達DDR1對奶牛乳腺上皮細胞增殖的影響
    2.4 干擾、過表達DDR1對奶牛乳腺上皮細胞周期的影響
    2.5 干擾、過表達DDR1對奶牛乳腺上皮細胞凋亡的影響
    2.6 干擾、過表達DDR1對奶牛乳腺上皮細胞增殖凋亡相關(guān)基因表達的影響
3 討 論
    3.1 DDR1對奶牛乳腺上皮細胞增殖、凋亡、周期的影響
    3.2 DDR1對奶牛乳腺上皮細胞增殖與凋亡相關(guān)基因表達的影響
4 結(jié) 論



本文編號：4050460