發(fā)布時間：2025-06-24 01:50

　　TG相互作用因子1(TGIF1)是TALE(轉錄激活因子樣效應蛋白)同源結構域蛋白家族成員之一。研究表明,TGIF1可通過招募組蛋白乙酰化抑制轉錄因子活性從而抑制TGF-β信號通路的活性,而TGF-β1能夠調(diào)節(jié)卵巢顆粒細胞激素的分泌、增殖和凋亡。目前,TGIF1調(diào)節(jié)奶山羊卵巢顆粒細胞分泌E2、P4和凋亡的作用尚不明確。本研究以關中奶山羊為研究對象,通過構建TGIF1過表達載體和TGIF1-si RNA研究TGIF1對卵巢顆粒細胞E2/P4分泌及對卵巢顆粒細胞凋亡的影響,闡明TGIF1在卵泡發(fā)育及閉鎖中的生物功能,主要獲得以下研究結果:1.構建TGIF1過表達載體及合成TGIF1-si RNA通過NCBI預測TGIF1基因CDS區(qū)全長,擴增出819bp CDS區(qū)全長序列。構建含有HindⅢ與XhoⅠ酶切位點的TIGF1過表達載體命名為pc DNA3.1-TGIF1,同時合成TGIF1基因干擾RNA命名為TGIF1-si RNA;用RT-q PCR及Western blot檢測技術檢測TGIF1的過表達及干擾效率,結果發(fā)現(xiàn),pc DNA3.1-TGIF1可顯著升高TGIF1的表達;TGIF1...

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號對照表
第一章 文獻綜述
    1.1 卵泡發(fā)育
        1.1.1 卵泡發(fā)育的研究進展
        1.1.2 顆粒細胞對卵泡發(fā)育的作用
        1.1.3 類固醇對卵泡發(fā)育的作用
    1.2 TGIF1 基因的研究進展
        1.2.1 TGIF家族概述
        1.2.2 TGIF1 的調(diào)控功能
        1.2.3 TGIF1與TGF-β信號通路
    1.3 TGF-β信號通路研究進展
        1.3.1 TGF-β超家族對卵泡發(fā)育的作用
        1.3.2 TGF-β1 信號通路對顆粒細胞的作用
    1.4 SP1 研究進展
        1.4.1 SP家族概況
        1.4.2 SP1 的轉錄功能
        1.4.3 SP1 在顆粒細胞中的作用
    1.5 研究的目的及意義
    1.6 研究思路及技術路線
        1.6.1 研究思路
        1.6.2 技術路線
第二章 TGIF1 對奶山羊卵巢顆粒細胞E2/P4 分泌的作用
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 樣品采集
        2.2.2 儀器設備
        2.2.3 主要試劑
        2.2.4 TGIF1 過表達載體的構建
        2.2.5 TGIF1 干擾RNA的合成
        2.2.6 顆粒細胞(GCs)的培養(yǎng)與轉染
        2.2.7 RT-qPCR檢測
        2.2.8 ELISA檢測
        2.2.9 Western blot檢測
        2.2.10 統(tǒng)計學分析
    2.3 結果與分析
        2.3.1 奶山羊卵巢顆粒細胞的鑒定
        2.3.2 TGIF1 過表達載體構建結果
        2.3.3 TGIF1 過表達及干擾效率檢測
        2.3.4 ELISA檢測TGIF1 對顆粒細胞E2/P4 分泌的影響
        2.3.5 RT-qPCR檢測激素合成關鍵酶基因的表達
        2.3.6 Western blot檢測激素合成相關基因的表達
    2.4 討論
    2.5 小結
第三章 TGIF1 通過TGF-β信號通路調(diào)節(jié)E2/P4 的分泌
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 樣品采集
        3.2.2 儀器設備
        3.2.3 主要試劑
        3.2.4 卵巢顆粒細胞的培養(yǎng)與轉染
        3.2.5 SP1 干擾RNA的合成
        3.2.6 RT-qPCR
        3.2.7 ELISA檢測
        3.2.8 Western blot檢測
        3.2.9 統(tǒng)計學分析
    3.3 結果與分析
        3.3.1 KGN處理對卵巢顆粒細胞E2/P4 分泌的影響
        3.3.2 KGN對 SMAD2/3 磷酸化的影響
        3.3.3 TGIF1對KGN處理后顆粒細胞E2/P4 分泌的影響
        3.3.4 TGIF1對SMAD2/3 表達及磷酸化的影響
        3.3.5 TGIF1 對轉錄因子SP1 表達的影響
        3.3.6 SP1 干擾RNA的合成及效率檢測
        3.3.7 Western blot檢測共轉染TGIF1和SP1 對激素關鍵酶基因表達的影響
    3.4 討論
    3.5 小結
第四章 TGIF1 對奶山羊卵巢顆粒細胞凋亡作用的研究
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 樣品采集
        4.2.2 儀器設備
        4.2.3 主要試劑
        4.2.4 細胞流式檢測凋亡
        4.2.5 RT-qPCR檢測
        4.2.6 統(tǒng)計學分析
        4.2.7 Western blot檢測
    4.3 結果與分析
        4.3.1 TGIF1 對卵巢顆粒細胞凋亡的影響
        4.3.2 RT-qPCR檢測凋亡相關基因表達
        4.3.3 Western blot檢測BCL-2/BAX基因表達
    4.4 討論
    4.5 小結
研究結論
創(chuàng)新點
進一步研究的問題
參考文獻
附錄
致謝
作者簡介



本文編號：4052316