發(fā)布時(shí)間：2025-06-26 00:51

　　Toll樣受體是機(jī)體內(nèi)一類重要的病原識(shí)別受體,能對(duì)入侵機(jī)體的病原微生物進(jìn)行及時(shí)的識(shí)別,從而啟動(dòng)機(jī)體固有免疫應(yīng)答并影響適應(yīng)性免疫的產(chǎn)生。本研究首次克隆并報(bào)道了四川白鵝Toll樣受體家族的TLR7和TLR21的cDNA序列,并進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。鵝TLR7包含一個(gè)完整的開(kāi)放閱讀框,編碼1045個(gè)氨基酸,其信號(hào)肽位于第1到27位,跨膜區(qū)位于第836位到860位,高度保守TIR結(jié)構(gòu)域位于第884位到1034位。鵝TLR21包含一個(gè)完整的開(kāi)放閱讀框,編碼975個(gè)氨基酸,其信號(hào)肽位于第1到35位,跨膜區(qū)位于第757位到779位,高度保守TIR結(jié)構(gòu)域位于第809位到951位。比較兩基因在不同物種之間蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)物種之間親緣關(guān)系越接近比對(duì)相似性越高。為了得到TLR7和TLR21在鵝體各個(gè)組織的分布情況,我們利用半定量RT-PCR和定量RT-PCR方法構(gòu)建了組織表達(dá)譜。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,選擇β-actin和GAPDH 作為內(nèi)參基因?qū)��?shí)驗(yàn)結(jié)果校正檢測(cè)。我們發(fā)現(xiàn)：TLR7的轉(zhuǎn)錄水平在雛鵝的法氏囊上最高,且在與免疫功能相關(guān)的組織如盲腸,哈德氏腺等也相對(duì)較高。值得注意的是,肺臟的相對(duì)表達(dá)量?jī)H次于法...

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 Toll樣受體的結(jié)構(gòu)與功能
    2 脊椎動(dòng)物的病原核酸識(shí)別Toll受體的研究進(jìn)展
        2.1 核酸識(shí)別Toll樣受體在哺乳動(dòng)物中的研究進(jìn)展
        2.2 禽類的病原核酸識(shí)別Toll樣受體的研究進(jìn)展
    3 本實(shí)驗(yàn)的研究目的及意義
第二章 鵝TLR7和TLR21基因的分子克隆
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 菌種與質(zhì)粒
        1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        1.4 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.5 相關(guān)溶液配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法與操作
        2.1 鵝TLR7和TLR21部分cDNA片段的擴(kuò)增
        2.2 目的基因片段的克隆與測(cè)序
        2.3 鵝TLR7和TLR21的cDNA全長(zhǎng)擴(kuò)增
        2.4 序列分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 鵝TLR7和TLR21核酸及氨基酸序列分析
        3.2 鵝及其他動(dòng)物的TLR7和TLR21氨基酸多序列比對(duì)分析
        3.3 鵝及其他動(dòng)物TLR7和TLR21氨基酸序列進(jìn)化樹(shù)分析
    4 實(shí)驗(yàn)討論
    5 本章小結(jié)
第三章 鵝TLR7和TLR21的組織表達(dá)譜
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法與操作
        2.1 正常鵝組織的選取與總RNA的提取
        2.2 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈
        2.3 半定量RT-PCR
        2.4 定量RT-PCR
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 鵝TLR7的雛鵝組織表達(dá)譜
        3.2 鵝TLR7在成年鵝與雛鵝免疫相關(guān)組織表達(dá)比較
        3.3 鵝TLR21在成年鵝與雛鵝全組織表達(dá)比較
    4 實(shí)驗(yàn)討論
        4.1 TLR7在雛鵝組織轉(zhuǎn)錄情況分析
        4.2 TLR7在成年鵝和雛鵝的免疫器官中的轉(zhuǎn)錄水平比較
        4.3 TLR21在成年鵝和雛鵝的組織器官中的轉(zhuǎn)錄水平比較
    5 本章小結(jié)
第四章 鵝TLR7和TLR21的免疫學(xué)活性檢測(cè)
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及毒株
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法與操作
        2.1 鵝淋巴細(xì)胞模型的建立
        2.2 激動(dòng)劑處理鵝淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答檢測(cè)
        2.3 鵝淋巴細(xì)胞應(yīng)對(duì)病毒感染的免疫應(yīng)答檢測(cè)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 免疫刺激劑刺激鵝脾臟淋巴細(xì)胞
        3.2 NGVEV感染鵝脾臟淋巴細(xì)胞
        3.3 免疫刺激劑刺激鵝外周血淋巴細(xì)胞
        3.4 NGVEV感染鵝外周血淋巴細(xì)胞
    4 實(shí)驗(yàn)討論
        4.1 免疫刺激劑對(duì)鵝脾臟淋巴細(xì)胞的影響
        4.2 NGVEV對(duì)鵝脾臟淋巴細(xì)胞的影響
        4.3 免疫刺激劑對(duì)鵝外周血淋巴細(xì)胞的影響
        4.4 NGVEV對(duì)鵝外周血淋巴細(xì)胞的影響
    5 本章小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介及發(fā)表論文情況



本文編號(hào)：4052890