發(fā)布時間：2025-03-14 21:27

　　 目的:探討衰老的大鼠骨髓間充質干細胞凋亡抗性是否增加且是否通過凋亡抑制蛋白(IAP)家族介導。方法:用DMEM/F12中加入10%胎牛血清(FBS)的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠骨髓間充質干細胞(BMSC)至第三代,使用D-半乳糖(D-gal)誘導成衰老的BMSC并用β-半乳糖苷酶染色做衰老鑒定。用腫瘤壞死因子α(TNF-α)和環(huán)己酰亞胺(CHX)共同處理正常對照組與衰老組的BMSC,通過貼壁細胞計數(shù)統(tǒng)計其生存率,并通過蛋白印跡法檢測兩組細胞中Cleaved PARP、Cleaved Caspase3蛋白、IAP家族成員c-IAP1、c-IAP2、XIAP以及衰老相關標志蛋白的水平。再用IAP抑制劑AT-406處理衰老的細胞,CCK-8檢測處理組以及未處理組細胞的細胞活力。最后用凋亡抑制劑z-VAD-fmk和AT-406共同處理正常對照組與衰老組細胞,觀察z-VAD-fmk能否減少IAP蛋白被抑制后所引起的細胞死亡。結果:與正常對照組相比,衰老的BMSC中由TNF-α和CHX共同誘導引起的細胞死亡數(shù)明顯減少,凋亡標志物Cleaved PARP和Cleaved Caspase3蛋白的水平降低,而I...

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
前言
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 大鼠原代BMSCs的分離培養(yǎng)
    1.3 細胞培養(yǎng)
    1.4 CCK-8試劑盒檢測細胞增殖活力
    1.5 β-半乳糖苷酶染色
    1.6 Western blot蛋白印跡分析
    1.7 流式細胞儀檢測細胞凋亡
    1.8 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 D-gal誘導骨髓間充質干細胞衰老
    2.2 D-gal誘導的衰老細胞凋亡抗性升高
    2.3 D-gal誘導的衰老細胞中c-IAP1、c-IAP2和XIAP表達升高
    2.4 AT-406誘導衰老細胞凋亡
3 討論



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